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克隆构建是分子生物学研究中最常用到的手段之一,我们提供包括克隆构建及其上下游相关服务的完整解决方案,并将依据目的基因的来源,灵活选择不同的克隆方法。
RNAi是一种经济、快捷、高效的特异性抑制基因表达的技术,有助于研究基因在生物模型系统中的作用,是研究基因功能的重要工具。
启动子续减分析是利用报道基因原理明确启动子转录活性关键区域的一种方法。将目的启动子克隆并插入PGL3报道基因质粒,转染细胞,检测其活性,初步确定其启动子范围。以全长的目的启动子报道质粒为基础,用5’末端序列续减法,构建了多个不同长度的启动子报道基因质粒。观察启动子活性差异,确定表达的核心区。进而用转录因子DNA结合位点查找工具Patch及MatInspector对此段序列进行分析,初步确定关键的转录因子结合位点,并可进行后续的位点突变、EMSA、ChIP实验进一步明确。
DNA甲基化是表观遗传学(Epigenetics)的重要组成部分,是最具特点的表观遗传学修饰。CpG二核苷酸5'端的胞嘧啶在DNA甲基化转移酶(DNMTs)的作用下转变为5'甲基胞嘧啶。哺乳动物中,CpG序列在基因组中出现的频率仅有1%,但在基因组的某些区域中,通常位于基因的启动子区或是第一个外显子区,CpG序列密度很高,可以达均值的5倍以上,成为鸟嘌呤和胞嘧啶的富集区,即CpG岛,只有CpG岛的胞嘧啶能够被甲基化。
基因分型,也就是单核苷酸多态性(Single Nucleotide Polymorphism,SNP)检测,主要是指在基因组水平上由单个核苷酸的变异所引起的DNA序列多态性。与其它分子标记相比,SNP分辨率最高也最为丰富,覆盖基因组范围大,遗传上比较稳定,在人类基因组中,估计平均每1000个碱基对就有1个SNP,估计其总数可达300万个甚至更多,是继微卫星之后的第三代遗传标记。
MicroRNA (miRNA):是含有茎环结构的miRNA前体,经过Dicer加工之后的一类非编码的小RNA分子(~21-23个核苷酸)。miRNA,以及miRISCs(RNA-蛋白质复合物)在动物和植物中广泛表达。因其具有破坏目的特异性基因的转录产物或者诱导翻译抑制的功能,miRNA被认为在生命活动过程中有重要作用。
通过荧光染料或荧光标记的特异性探针,对PCR产物进行跟踪,实时在线监控反应过程,结合相应的软件可以对产物进行分析,计算待测样品的初始模板在各组样本间差异。
通过PCR方法从mRNA 水平检测目的基因表达的方法。